一、步骤：

1. 取新鲜的足够小的样品立刻置于pH=7.2的固定液（含2%PFA和2.5%的戊二醛的混合液）中，4°C过夜或者室温固定2h以上。
2. 0.1M的PB缓冲液冲洗样品3次，10min/次。
3. 1%饿酸后固定1h。
4. 0.1MPB缓冲液冲洗3次，10min/次。
5. 梯度酒精脱水，50%，70%，80%，90% 10min，100%酒精3次，10min/次。
6. 酒精：丙酮=1:1   10min。
7. 丙酮  10min。
8. 丙酮：812树脂 =1:1  2h，RT
9. 丙酮：812树脂 =1:2  2h，RT
10. 丙酮：812树脂 =1:3  2h，RT
11. 树脂过夜。
12. 更换新鲜树脂8h。
13. 包埋样品，RT静置4h。.
14. 37°C过夜。
15. 60°C24h。
16. 制作超薄切片。
17. 电镜观察拍照。
二、注意事项：
1. 如有条件对实验动物用混合固定液（（含2%PFA和2.5%的戊二醛的混合液）进行灌流（perfusion fixation），或者在低温环境下用锋利的切割器械迅速取材。
2. 动作迅速：组织离体后应尽快将其快速放入化学固定液内，使组织和细胞尽可能保持原来的生活状态。
3. 减少损伤：选择锋利切割器械，避免或尽量减少牵拉或挤压组织。
4. 组织块大小：为使组织得到均匀而充分固定，所取材料应小于1mm³。
5. 低温操作：为减少对组织细胞酶活性的破坏，最好在4℃下操作，所用容器、器械及固定液均需要预冷。在血液供给停止后，防止组织和细胞内各种酶的作用使组织发生自溶，降解组织中蛋白、核酸等主要成分。
6. 需要定位样品请与相关人员咨询特定取材方式。
常见样品脱水时间：
细胞8min
组织10min,若较嫩为8min
细胞器2min
脂肪8min或＜8min
叶片15min
根15min
藻类15min
菌10-15min
以上均为常规注意事项，送样之前和送样时请与相关人员当面进行沟通，然后选择适合的处理方法。