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3D扫描Pro--多点时间三维序列采集
2018/11/1287

作者:曹慧珍 

很多时候,Z-序列需要和多点或时间序列连用,但这时会遇到很多问题! 

我们想象中样品是整齐的排列在小皿里 

直接设定Top、Bottom、Step,ND窗口中勾选Z、XY、T,Run Now开始采集图像就好啦。 

但是样品通常长这样: 

样品在小皿上的高度并不相同,如果直接设定Top、Bottom,采集的厚度将会翻倍,浪费大量时间。 

另一种Z轴范围选定方法就发挥作用了 

1、ND Acquisition窗口XY选项卡下记录样品的XYZ信息(Z需要是3D stack的中间面); 

2、ND Acquisition窗口Z选项卡下勾选黄色漏斗状图标; 

3、设定样品step和总厚度; 

4、点击run now开始采集图像序列。 

样品的总厚度和每个点的中间焦面可通过设定top和Bottom的方法获得,立方体中间的数值即中间面。 

这种方法工作原理:先到达记录的XYZ位置,根据中间面Z计算出三维序列的起始面,开始采集三维序列,然后到达另一个XYZ位置,计算出新的Z轴起始面,采集另一个三维序列,循环往复。 

还有的样品更任性: 

样品不止在小皿上的高度不同,它们自己的厚度也相差很大,这时候用上面的方法拍,range需要由最厚的样品决定,比较浪费时间, 

NIS-element有终极武器ND Sequence Acquisition 

1、鼠标右击软件上的空白部分,从弹出的菜单中选择[Acquisition Controls] -> [ND Sequence Acquisition]以调出对话框。 

2、点击add添加一个ND程序,新弹出一个类似ND Acquisition的窗口 

3、XY选项卡下记录位置信息,Z选项卡下按照top、bottom的方法或找中间面的方法设定Z轴扫描范围; 

4、点击OK; 

5、回到ND Sequence Acquisition主窗口,add添加另外的ND程序,多次重复此步骤; 

6、勾选[Time lapse]设定时间序列; 

7、run now启动程序。 

有过细胞timelapse拍摄经验的小伙伴都知道,细胞会发生热漂移现象,必须打开PFS系统才能实现长时间的拍摄,XY选项卡下记录每个点的锁焦面,以该面作为relative去采集多点三维时间序列,然而细胞往往是贴壁的,锁焦面通常是细胞中信号最为清晰的焦面,而非中间面。 

这个时候我们可以选择另一种方式设定Z轴扫描范围,先调焦确定最清晰的焦面(锁焦面)和top/bottom之间的距离,然后打开PFS,XY选项卡下记录位置焦面高度信息,Z选项卡下,分别设定向上向下扫描厚度,然后设定step,开始ND程序采集。 

XY-Z-T程序略复杂,大家有需求可以预约辅助实验哦! 

本文章版权归清华大学生物医学测试中心尼康影像中心所有

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