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激光片层扫描显微镜(Lightsheet)样品制备
2018/06/0698

作者:冯倩倩 

激光片层扫描显微镜(Light SheetFluorescence Microscopy)是一种新型显微系统,具有成像速度快、多视角成像、成像视野大、观察时间长等优点,可以对斑马鱼、果蝇、线虫、拟南介等荧光标记的模式生物进行长时间观察;同时,该设备具有光损伤小、光毒性和光漂白性小等特点,适合胚胎形成过程中器官发育基因表达的时间、空间模式荧光成像。还可利用荧光标记,测定样本快速动态变化,固定样本的快速精细三维结构成像,如:透明化的小鼠胚胎、脑、肺、肝脏、肾脏、胰腺、卵巢等组织器官的实时成像。 

一、confocal microscope和lightsheet microscope的区别 

传统激光扫描共聚焦显微镜和激光片层扫描显微镜在成像原理、样品制备、载物形式、适用样品等方面均有较大不同,见下图。

Confocal和lishtsheet原理及lightsheet载物台 

二、lightsheet样品制备方法 

1. 包埋 Embedded Samples 

可以将部分样品包埋在1-4%浓度的低熔点琼脂糖中,不同浓度的琼脂糖其稳定性不同,对活体样品的影响也不同。 

适合样品:斑马鱼、果蝇、线虫、拟南介等荧光标记的模式生物。 

包埋尺寸:平台配有不同规格的毛细管和1ml注射器,样品大小0.23mm-3.06mm,介于毛细管和注射器直径的1/3-2/3之间,此时稳定性和成像效率均比较高。

包埋样品合适尺寸 

2. 悬挂 Hanging Samples 

大组织透明化样品可以通过悬挂的方式放置在样品载物台上,样品最大尺寸是1cm*1cm*1cm。 

适合样品:水溶性试剂透明化的小鼠胚胎、脑、肺、肝脏、肾脏、胰腺、卵巢等。 

上样方式:平台配有不同形式的样品粘托和样品托盘,可以将样品通过粘贴悬挂或者托挂的方式放置在载物台上,没有固定形式,大家集思广益。

悬挂样品模式图

悬挂样品实物图 

3. 围封 Enclosed Samples 

由于高浓度的琼脂糖浓度会影响部分活体样本的发育和状态,琼脂糖浓度太低又会影响样品的稳定性,此时,我们可以选择将样品围封在FEP管中。 

适合样品:折射率和FEP、琼脂糖相似的样品,如斑马鱼、果蝇、线虫、拟南介等。 

样品大小:平台配有不同规格的FEP管,具体围封方式类似于包埋方式。

围封样品模式图

lightsheet样品制备的方法很多,不同尺寸的样品对应不同的处理方法,适用但不局限于以上介绍的方法,大家如需试用,还需集思广益,开放思维。但其好处也是多多,成像视野大、拍照速度快、光漂白性小、观察时间长,不妨也来试试吧! 

本文所有图片均来自今年lightsheet培训讲座的内容,感谢Zeiss公司对平台培训工作的支持! 


本文章版权归清华大学生物医学测试中心共享仪器平台所有

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