基因文库平台是由生命科学联合中心资助的非仪器类平台，归属清华大学生物医学测试中心共享仪器平台管理，位于生物技术馆1-102A室，自2014年5月正式对校内师生提供开放服务。基因文库平台主要提供human和 mouse全基因组shRNA干扰文库及CRISPR基因编辑文库，为清华大学基因编辑相关研究的课题组提供便利和支持。

RNA干扰技术是为哺乳动物细胞功能基因组研究而开发的，作为基础生物学研究和药物开发的有力工具，受到了研究人员的青睐。基因文库平台的shRNA干扰文库覆盖人类和小鼠全基因组，拥有46,802个基因，247,661个克隆。40%的基因干扰效率通过了高通量以及高内涵筛选的验证，可以稳定转染或瞬时转染、用于转导的病毒颗粒、整合后长期干扰抑制、转导几乎所有的细胞类型等优点。每个基因有3-5个shRNA克隆，至少有一个克隆干扰效率能达到70%，较少脱靶效应，满足科研用户的绝大需求。

CRISPR基因编辑文库由SANGER HUMAN和 MOUSE CRISPR LIBRARY（GLY）组成，含克隆75,040个，基因数37,520个。基于优化的Sanger慢病毒载体，CRISPR基因编辑文库在难转染细胞系中仍能获得高效稳定的基因敲除，嘌呤霉素筛选标记和BFP标签有效简化筛选流程和提高筛选效率，极高的剪切效率使得其在基因筛选、功能基因的大规模敲除、构建转基因干细胞、核苷酸检测等方面得到广泛应用。

基因文库平台所有样本以甘油菌形式保存，日常由专业人员运行和维护，根据课题组的需求可在最短时间内提供列表中所涵盖的文库材料，其目的及意义旨在保证高效、特异结果的基础上，降低用户的时间成本和经济成本。

一、 文库列表

1. Custom Glycerol-human shRNA library（人类全基因组shRNA干扰文库）

2. Custom Glycerol-mouse shRNA library（小鼠全基因组shRNA干扰文库）

二、 基因及克隆数量

备注：在我们提供的文库总表中已标记了某个克隆是否已被验证。

三、 载体信息

TRC1.5 Vector：pLKO.1-puro Vector

TRC2 Vector：TRC2-pLKO-puro Vector

四、 病毒包装系统

目前实验室采用的病毒包装质粒是：pΔ8.9，Vsv-G和shRNA plasmid。产毒用的细胞是293FT。供大家参考。平台暂无法提供病毒包装质粒。

五、Control信息

注： TRC1.5 control对TRC1.0同样适用。

关于shRNA干扰文库更详细的介绍见网址：http://www.sigmaaldrich.com/china-mainland/zh/life-science/functional-genomics-and-rnai/shrna.html。

一、 文库列表

1. SANGER HUMAN CRISPR LIBRARY, GLY

2. SANGER MOUSE CRISPR LIBRARY, GLY

3. 亚文库参考表单

注：CAS9PROT需自行订购，网址参考：https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/espcas9pro?lang=zh®ion=CN。

五、  Control信息

如下三种不同的阴性对照质粒的载体同本文库中的慢病毒载体 (LV04 vector)一致。三者的区别是仅gRNA序列不同，序列信息如下。三个gRNA 均不靶向人、小鼠和大鼠的任何基因。

关于CRISPR基因编辑文库更详细的介绍见网址：https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/technical-documents/technical-article/genomics/advanced-gene-editing/crispr-clone-control-and-cas9-essentials。

1. 使用人在平台提供的文库总表中找出所需的克隆信息并E-mail至gxyq@mail.tsinghua.edu.cn；同时填写文库使用申请单并打印签字后交给管理员；
2. 由管理员找出克隆给使用人（每个克隆提供约0.5ml的菌液）；
3. 定期由基因文库平台负责和各课题组结算。